Перспективы регуляции процесса апоптоза в фармакологических целях, а также механизмы его регуляции и их изучение

Главная страница
Контакты

    Главная страница



Перспективы регуляции процесса апоптоза в фармакологических целях, а также механизмы его регуляции и их изучение



страница5/11
Дата12.01.2017
Размер1.94 Mb.
ТипРеферат


1   2   3   4   5   6   7   8   9   10   11

I Светоприёмник




Рисунок 5. Основные принципы метода спектрофотометрии.

Далее влияние SDS на цитохром ц мы исследовали методом спектроскопии. Стандартный спектр поглощения цитохрома ц (при его концентрации в буферном растворе 20 мкМ) выглядит таким образом (диаграмма 3.). На диаграмме 3 мы видим только 2 пика. Пик в района 695 нм мы видеть не можем, так как для того, чтобы его увидеть, нам нужен гораздо более маленький масштаб, чем на диаграмме 3.

Пик 695 представлен на диаграмме 4.

Для проведения опыта мы брали кювету на 3 мл, подбирали соответствующие концентрации Cyt C и SDS в расчете на то, чтобы вместе с фосфатным буфером объём исследуемого раствора составлял 3 мл.






Диаграмма 3. Спектр поглощения 20 мкМ цитохрома ц.

По оси абсцисс на данной диаграмме отложена длина волны (нм), по оси ординат – значение оптической плотности (у.е.).

При данной концентрации спектр имеет 3 пика, из которых на диаграмме видны только 2 из них (пик на 420 нм и 540 нм), третий пик (695 нм) на диаграмме не виден из-за большого масштаба диаграммы.

Пик в районе 695 нм можно увидеть, делая измерения в узком интервале оптической плотности, Результат показан на диаграмме 4. По оси абсцисс на нем взята оптическая плотность в промежутке от 0,05 до 0,1 у.е., а также для более удобного просмотра и анализа результатов кривая спектра поглощения по оси абсцисс (на ней отложена длина волны нм) взята в интервале от 650 до 710 нм. На этих интервалах пик 695 виден очень хорошо, и можно легко увидеть, как уменьшается спектр поглощения в промежутке данных длин волн при добавлении SDS.





Диаграмма 4. Спектр поглощения цитохрома ц. По оси абсцисс отложена длина волны в нм, по оси ординат – оптическая плотность ( в у.е.). Это тот же самый опыт , что и опыт, показанный на диаграмме 3, но взят намного более маленький масштаб по оси ординат (оптическая плотность), и для удобства немного уменьшен масштаб по оси абсцисс (длина волны).

Далее мы добавляли к раствору цитохрома SDS, и снова проводили измерения. Полученные результаты представлены на диаграмме 5.

На этой диаграмме видно, что с увеличением концентрации SDS оптическая плотность на данном участке уменьшается, что связано с изменением конформации цитохрома ц, т.е. мы видим, что наше предположение о том, что SDS изменяет конформацию белка цитохрома ц подтвердилось. Теперь мы можем наглядно увидеть связь между концентрацией SDS в растворе цитохрома ц и оптической плотностью (диаграмма 6).

Опыт мы проводили с концентрацией цитохрома ц 90мкМ, SDS в таком количестве, чтобы он был в конкретной относительно Cyt C концентрации, а затем фосфатным буфером объём раствора доводился до 3 мл, и образец помещался в спектрофотометр для измерения спектра поглощения образца.



Результаты опытов представлены на диаграмме 5:



Диаграмма 5. Зависимость спектра поглощения цитохрома ц и SDS от длины волны в разных концентрациях.

На данной диаграмме по оси абсцисс отложена длина волны ( в нм) в интервале от 650 до 710 нм, по оси ординат отложена оптическая плотность в у.е. в интервале от 0 до 0,1 у.е. Данные масштабы позволяют нам чётко видеть спектр поглощения в районе 695 нм, и позволяет видеть уменьшение оптической плотности с увеличением содержания SDS в растворе. Отношение концентраций цитохрома ц и SDS можно определить по цвету, используя столбец с обозначениями на правой стороне диаграммы.
По данным эксперимента можно точно сказать, что оптическая плотность в данном диапазоне длин волн уменьшается с увеличением концентрации содиумдодецилсульфата в образце, что объясняется изменением конфигурации третичной структуры белка.

Теперь на основе этого можно построить график зависимости оптической плотности в интервале длин волн от 605 до 710 нм от концентрации содиумдодецилсульфата в исследуемом образце. Он представлен на диаграмме 6. По ней можно видеть, что с увеличением концентрации SDS. Для большей наглядности на диаграмме представлена линия, показывающая абсолютную концентрацию SDS в растворе с Cyt C в данном опыте (в миллимолях).




Диаграмма 6. Соотношения между концентрацией SDS и оптической плотностью.

На левой шкале диаграммы отложена оптическая плотность (у.е.), на правой –концентрация SDS в отношении к 1 цитохрому. По оси абсцисс показана обсолютная концентрация цитохрома ц в молях. Синей кривой показана зависимость изменения оптической плотности от концентрации SDS, розовой кривой показано изменение концентрации SDS в процессе эксперимента.
Данные, по которым построен график, представлены в таблице 2:



Оптическая плотность

Абсолютная концентрация (мМ)

Относительная концентрация

2.007

0.09

1

1.996

0.36

4

1.991

0.9

10

1.990

1.35

15

1.989

1.89

21

1.988

2.88

32

1.988

3.87

43

1.987

4.95

55

1.983

6.03

67

1.982

8.46

94

1.982

10.89

121

Каталог: fileadmin -> rsmu -> img -> mbf -> cmfrb -> documents -> referati
referati -> Реферат: острая и хроническая почечная недостаточность. Механизмы повреждения почек. Подходы к лечению
referati -> Реферат по фармакологии студентки 471 гр. Воробьёвой Ольги. 2008г. Содержание: Общая информация
mbf -> Комплексные числа
mbf -> Рабочая программа учебной дисциплины общая патология направление подготовки (специальность) 060601 Медицинская биохимия
mbf -> Рабочая программа учебной дисциплины «Физиология с основами анатомии»
mbf -> Рабочая программа учебной дисциплины нормальная физиология наименование учебной дисциплины
mbf -> Программа спецкурса по выбору название курса Медицинские нанобиотехнологии Специальность Медицинская биохимия
mbf -> Рабочая программа учебной дисциплины общая патология направление подготовки (специальность) 060602 Медицинская биофизика
mbf -> Министерство здравоохранения и социального развития
1   2   3   4   5   6   7   8   9   10   11

  • Рисунок 5. Основные принципы метода спектрофотометрии.
  • (диаграмма 3 .). На диаграмме 3
  • Диаграмма 3. Спектр поглощения 20 мкМ цитохрома ц. По оси абсцисс на данной диаграмме отложена длина волны (нм), по оси ординат – значение оптической плотности (у.е.).
  • При данной концентрации спектр имеет 3 пика, из которых на диаграмме видны только 2 из них (пик на 420 нм и 540 нм), третий пик (695 нм) на диаграмме не виден из-за большого масштаба диаграммы.
  • Диаграмма 5. Зависимость спектра поглощения цитохрома ц и SDS от длины волны в разных концентрациях.
  • Диаграмма 6. Соотношения между концентрацией SDS и оптической плотностью.
  • в отношении к 1 цитохрому. По оси абсцисс показана обсолютная концентрация цитохрома ц в молях. Синей кривой показана зависимость изменения оптической плотности от концентрации SDS
  • , розовой кривой показано изменение концентрации SDS в процессе эксперимента. Данные, по которым построен график, представлены в таблице 2
  • Оптическая плотность Абсолютная концентрация (мМ) Относительная концентрация