Определение фактора некроза опухоли α(ФНОα) в сыворотке крови

Главная страница
Контакты

    Главная страница



Определение фактора некроза опухоли α(ФНОα) в сыворотке крови



страница11/15
Дата12.01.2017
Размер2.31 Mb.
ТипОтчет


1   ...   7   8   9   10   11   12   13   14   15

4.2.3 Определение фактора некроза опухоли α(ФНОα) в сыворотке крови

Для изучения содержания ФНОα использовали метод твердофазного иммуноферментного анализа («Протеиновый контур», Спб, Россия).


Таблица 16 - Показатели сывороточных маркеров апоптоза в группе здоровых доноров, (пкг/мл).

Сывороточные показатели апоптоза

Показатели контрольной группы

ФНО α

18,0±2,0

sFas

1250,5 ± 135,5

TRAIL

199,0±5,3

Исследуемый образец (сыворотка, раневое отделяемое) в количестве 50 мкл вносили в 50 мкл инкубационного буфера и выдерживали при комнатной температуре 2часа. Затем удаляли содержимое ячеек и промывали 4 раза. Добавляли биотинилированный конъюгат в объеме 100мкл и инкубировали 2 часа при комнатной температуре. После четырехкратного промывания добавляли 100мкл стрептавидинового конъюгата и спустя 30 минут 100мкл хромогенного раствора. После 30 минутной инкубации добавляли 100мкл стоп-раствора и считывали оптическую плотность при 450нм.

Для сопоставления показателей пациентов с данными маркеров апоптоза у здоровых людей провели исследование 15 доноров (таблица 16)

У пациентов с герпетической и папилломавирусной инфекций помимо показателей сыворотки крови измерялист показатели вагинального отделяемого (у женщин) и уретры (у мужчин). В связи сэтим были изучены маркеры апоптоза в этих биологических жидкостях у доноров (таблица 17).


Таблица 17 - Показатели маркеров апоптоза в вагинальном и уретральном отделяемом в группе здоровых доноров (пкг/мл).

Показатели апоптоза

Биологический материал

Показатели контрольной группы

ФНО α

вагинальный секрет

13,0±2,0

уретральный секрет

15,0±2,0

sFas

вагинальный секрет

1000,5 ± 150,5

уретральный секрет

1300,5 ± 100,5

TRAIL

вагинальный секрет

145,0±25,0

уретральный секрет

160,0±15,0

Статистическая обработка полученных результатов


При математической обработке результатов исследований были использованы следующие методы: расчет средних значений и доверительный интервал, рассчитанные по данным n измерений. Доверительный интервал оценивали с использованием критерия Стъюдента для р<0.05. Статистическую обработку и расчет корреляционного коэффициента проводили с использованием программы Microsoft Excel.

Глава 5 Результаты исследований




5.1 Cывороточные показатели апоптоза при парентеральных гепатита

Исследование содержания в сыворотке крови расворимых мембранных маркеров апоптоза — растворимого FAS лиганда (sFASL), индуцирующего апоптоз TNF-зависимого лиганда для рецепторов DR4 и DR5 TRAIL и концентрацию фактора некроза опухоли-α осуществляли посредством иммуноферментного энзим-связанного иммуносорбентного анализа (enzym-linked immunosorbent assay — ELISA) c использованием коммерческих наборов

Для оценки ФНО- индуцированного апоптоза в крови у больных вирусными гепатитами был изучен уровень растворимого FAS лиганда, позволяющий оценить активность апоптоза в исследуемых группах.

В динамике заболевания вирусными гепатитами обследовано 155 больных хроническими вирусными гепатитами. Из них – 76 больных с хроническим вирусным гепатитом В, 37 пациентов с хроническим вирусным гепатитом С и 38 – с хроническим вирусным гепатитом – mixt. Обследование проводилось в разгар клинических проявлений, при поступлении в стационар и через зо дней после начала стационарного лечения. В качестве контрольной группы было обследовано 15 практически здоровых людей, являющихся донорами республиканской станции переливания крови.

При изучении ФНО-индуцированного пути апоптоза у больных вирусным гепатитом В были выявлены следующие закономерности. При поступлении в стационар, когда максимально выраженными были симптомы интоксикации, иногда - желтуха и, соответственно, биохимические показатели цитолитического, мезинхимально-воспалительного и холестатического синдромов, у больных из данной группы отмечалось существенное повышение концентрации исследуемого фактора. В периоде купирования клинических и биохимических изменений, на 30-е сутки после поступления показатели FASL достоверно снижались, но не приходили в норму.

У больных хроническим вирусным гепатитом С отмечались однонаправленные изменения концентрации FASL, как и у больных хроническим вирусным гепатитом В. При поступлении в стационар, когда у больных отмечается интоксикация и соответственно изменения биохимических показателей было выявлено закономерное повышение содержания FASL в сыворотке крови. В периоде купирования клинических и биохимических изменений показатели FAS лиганда достоверно снизились, но не приходили в норму.

Из таблицы 18 видно, что изменения содержания FASL связаны с этиологической структурой гепатитов. При гепатите С выявляется достоверно более высокая концентрация изучаемого показателя по сравнению с данными при остром вирусном гепатите В и у больных mixt-гепатитом. Причем стоит отметить, что даже через 30 дней изучаемый показатель в группе больных ХГС – самый высокий в представленных группах.

При изучении концентрации ФНО в плазме крови были получены сопоставимые с показателями FASL результаты. Имеет место достоверное повышение концентрации интерлейкина во всех периодах обследования в трех представленных группах. Однако, в отличие от данных по FASL, наиболее высокие результаты ФНО в сыворотке крови наблюдались в группе больных с хроническим вирусным гепатитом В, достоверно отличающиеся от показателей в группе с ХВГС и mixt-гепатитами. Такой результат, по-видимому, является следствием выраженности некровоспалительных процессов у больных ХВГВ.

При изучении концентрации еще одного растворимого лиганда из группы ФНО-индуцирующих апоптоз – TRAIL были получены следующие данные. В отличие от полученных повышенных показателей FASL и ФНО в сыворотке крови у больных хроническими вирусными гепатитами, для показателей TRAIL имелась противоположная тенденция. Во всех периодах обследования в представленных группах пациентов имело место достоверное снижение концентрации исследуемого фактора. Причем, следует отметить, что самые низкие значения из представленных регистрировались в группе больных с хроническим вирусным гепатитом С, в отличие от группы пациентов с хроническим вирусным гепатитом В и хроническими mixt-гепатитами.

Таблица 18 - Показатели содержания ФНО-α, sFas и TRAIL в сыворотке крови у больных хроническими вирусными гепатитами, (пкг/мл).



группа пациентов

показатель

При поступлении в стационар

Через 30 суток

вирусные гепатиты

ХВГВ

ФНО α (n=30; 17)

55,0±1,61,3

64,0±2,11,2,3

sFas

(n=46; 22)



1739,0±64,71,3

1652,0±123,51,3

TRAIL

(n=29;18)



119±13,01,3

107±16,21

ХВГС

ФНО α

(n=20;14)



41,0±3,31

35,0±1,21

sFas

(n=20;15)



2366,0±85,71

2317±74,61

TRAIL

(n=15;11)



55±19,61

78±22,41

ХВГ-mixt

ФНО α

(n=27;19)



48±1,91

49±3,61,3

sFas

(n=25;17)



2177±73,31

1488±154,41,2,3

TRAIL

(n=15;12)



112±21,71

105±24,31

здоровые доноры

(n=15)


ФНО α

18,0±2,0

-

sFas

1250.5 ± 135.5

-

TRAIL

199±5,3

-

Примечания к таблице: 1 - достоверность различий по отношению к показателям доноров, р<0,001; 2- достоверность различий по отношению к показателям предыдущего периода, р<0,001, 3- достоверность различий к показателям у больных ХВГС, р<0,001

Следует отметить, что при исследовании сывороточных маркеров апоптоза у всех групп пациентов с хроническими вирусными гепатитами нет достоверной разницы представленных показателей в зависимости от периодов обследования. То есть имеет место монотонная тенденция и при обострении воспалительного процесса и после полученного симптоматического лечения.

Интересные данные были получены при исследовании сывороточных маркеров апоптоза в зависимости от степени биохимической активности в исследуемых группах пациентов с хроническими вирусными гепатитами.

Наиболее выраженные изменения изучаемых показателей были получены в группе с высокой степенью биохимической активности (таблица 19). Наблюдалась та же тенденция, что и при анализе группы пациентов в общих группах. Достоверно более высокие показатели концентрации sFAS были получены во всех периодах заболевания у больных с хроническим вирусным гепатитом С с умеренной и высокой степенью биохимической активности, по сравнению с группами больных с хроническим вирусным гепатитом В и mixt-гепатитами. С другой стороны, у этой группы больных были получены достоверно более низкие показатели растворимого TRAIL при всех вариантах биохимической активности.

Как и в таблице 18, наиболее высокие показатели концентрации ФНО-α были выявлены в группе больных с хроническим вирусным гепатитом В, по сравнению с данными у пациентов с хроническим вирусным гепатитом С и mixt-гепатитами при всех степенях биохимической активности.
Таблица 19 - Показатели содержания ФНО-α, sFas и TRAIL в сыворотке крови у больных хроническими вирусными гепатитами в зависимости от степени биохимической активности (пкг/мл).


группа пациентов

показатель

При поступлении в стационар

Через 30 суток

вирусные гепатиты

ХВГВ

миним.


степени активности

ФНО α (n=8; 7)

37,0±2,21,3,4

44,0±1,71,3,4

sFas

(n=8; 8)


1535,0±85,33

1484,0±111,5

TRAIL

(n=7;7)


151±17,01,3

131±15,41

ХВГС

миним.


степени

активности



ФНО α

(n=13;11)



26,0±2,31,4

31,0±1,91

sFas

(n=12;13)



1921,0±65,71,4

1746,0±71,31,4

TRAIL

(n=13;11)



72±21,41

94±18,21

ХВГ-mixt

миним.


степени

активности



ФНО α

(n=11;10)



42±1,61,3

44±2,71,3

sFas

(n=11;11)



1815,0±76,31,4

1380,0±123,12,3,4

TRAIL

(n=9;10)


134±31,51,3

125±31,31

ХВГВ

умерен.


степени активности

ФНО α (n=49; 47)

52±0,91,3

61±0,71,3

sFas

(n=48; 38)



1723,0±42,31,3

1592±36,21,3

TRAIL

(n=47;37)



132±2,61,3

109±3,21,2,3

ХВГС

умерен.


степени

активности



ФНО α (n=9; 7)

40±4,31

38±5,21

sFas

(n=8; 8)


2268,0±76,81

2367,0±74,91

TRAIL

(n=9;7)


54±5,91

79±4,61,2

ХВГ-mixt

умерен.


степени

активности



ФНО α (n=10; 7)

49±3,91

50±4,21,3

sFas

(n=9; 8)


2023,0±62,11,3

1495,0±68,72,3

TRAIL

(n=10;7)


109±33,61,3

103±36,71,3

ХВГВ

высокой


степени активности

ФНО α (n=19; 17)

63±1,31,3,4

78±1,51,2,3,4

sFas

(n=18; 17)



1874,0±64,11,3

1795±56,91,3,4

TRAIL

(n=17;19)



102±4,71,3,4

92±5,41,3,4

ХВГС

высокой


степени

активности



ФНО α (n=15; 13)

56±1,71,4

32±2,71,2

sFas

(n=14; 12)



2512,0±62,41

2722,0±69,41,2,4

TRAIL

(n=15;11)



45±3,21,4

63±2,81,2,4

ХВГ-mixt

высокой


степени

активности



ФНО α (n=17; 15)

62±2,11,3,4

58±2,81,3

sFas

(n=16; 15)



2179,0±58,61,3

1659,0±62,11,2,3

TRAIL

(n=17;14)



98±5,81,3

88±4,71,3

здоровые доноры

(n=15)





18,0±2,0

-




1250.5 ± 135.5

-




199±5,3

-

Примечания к таблице: 1 - достоверность различий по отношению к показателям доноров, р<0,001; 2- достоверность различий по отношению к показателям предыдущего периода, р<0,001, 3- достоверность различий к показателям у больных ХВГС, р<0,001; 4- достоверность различий по отношению к показателям с умеренной степенью биохимической активности в каждой группе.

1   ...   7   8   9   10   11   12   13   14   15

  • Глава 5 Результаты исследований