МОЛЕКУЛЯРНО-БИОЛОГИЧЕСКАЯ ИДЕНТИФІКАЦИЯ МИКОВИРУСА

Главная страница
Контакты

    Главная страница



МОЛЕКУЛЯРНО-БИОЛОГИЧЕСКАЯ ИДЕНТИФІКАЦИЯ МИКОВИРУСА



страница17/35
Дата18.08.2017
Размер7.7 Mb.


1   ...   13   14   15   16   17   18   19   20   ...   35

МОЛЕКУЛЯРНО-БИОЛОГИЧЕСКАЯ ИДЕНТИФІКАЦИЯ МИКОВИРУСА MVX ШАМПИНЬОНА ДВУХСПОРОВОГО (AGARICUS BISPORUS /J.LGE/ IMBACH) В ЗАКРЫТОМ ГРУНТЕ
Т. В. ИВАНОВА, кандидат сельскохозяйственных наук

Национальный университет биоресурсов и природопользования Украины


Экспериментальная часть работы выполнена в течение 2006-2011 гг на базе проблемной научно-исследовательской лаборатории фитовирусологии и биотехнологии Национального университета биоресурсов и природопользования Украины. Отдельные исследования проведены в научно-исследовательском отделе молекулярно-диагностических исследований Украинской лаборатории качества и безопасности продукции АПК, лаборатории производства мицелия ГП НДВ агрокомбинат "Пуща-Водица", на частных грибных предприятиях г. Киева и области.Для исследования вирусных патогенов грибов использовали образцы со специфическими симптомами и без них. Объектами исследований послужили плодовые тела шампиньоны двоспоровои, компост, мицелий, кровельный грунт. Для анализов отбирали плодовые тела с выраженными симптомами заболеваний. За инфицированными грибами наблюдали в течение всех волн плодоношения. Как контроль были плодовые тела шампиньоны двоспоровои, которые подбирали согласно результатам визуальной оценки на поражение и электронно-микроскопического анализа в лабораторных условиях [Бойко 1990, 1999; Grogan, 2002]. Для диагностики и идентификации вирусов применяли методы электронной микроскопии выделения и идентификации длРНК. Электронно-микроскопическое исследование выделенного нативного материала из образцов осуществляли методом негативного контрастирования при фиксации препарата 2%-м раствором фосфорновольфрамовои кислоты и изучали на электронном трансмиссионном микроскопе ЭМВ-3А [Подгорный, 2002].Для идентификации и выделения вирусных патогенов из шампиньонов применяли метод целлюлозной хроматографии. Для этой цели отбирали образцы шампиньонов со специфическими симптомами, которые выражались в потемнении, лизис мицелия, деформации плодовых тел, водянистости ножек и шляпок, вытянутости ножек и отмирании шляпок, образовании некрозов и опухолей (енаций) на плодовых телах, побурении мицелия и плодовых тел, резком изменении морфологии, окраске тканей плодовых тел и т.д. [Morris, Dodds, 1979; Rodrigo Valverde, 1990; Мельничук, 2001].Выделение длРНК из плодовых тел грибов проводили по методикам [Rodrigo Valverde, 1990; Мельничук, 2001] с собственными модификациями. Для этого 10 г образцов плодовых тел шампиньонов измельчали ​​и гомогенизувалы массу с добавлением жидкого азота в фарфоровых ступках. Гомогенизированные образцы переносили в центрифужные пробирки, в которые добавляли 12 мл буфера 2х SТЕ (H2O - 500 мл, NaCl - 29г, tris - 30,5 г, EDTA - 1,85 г), 1 мл 1% SDS (H2O - 100 мл, додицилосульфат натрия - 10 г) и 1 мл бентонита, перемешивали на шейкере в течение 15 мин до образования однородной массы. В дальнейшем добавляли 17 мл SТЕ-фенола (H2O - 500 мл, 2х SТЕ - 500 мл, рН 4,5) и 17 мл хлороформ-изоамилу (24:1) и центрифугировали 20 мин при 2500 об / мин. После центрифугирования отделяли водную фазу и снова центрифугировали 10 мин при 8000 об / мин, отбирали надосад и добавляли 1,5 г целлюлозы, 3 мл абсолютного этанола, перемешивали в течение 15-20 мин. Затем образцы помещали в лед на 30 мин при температуре -15 º С. Содержимое пробирок переносили в колонки, добавляли буфер STE-OH (STE - 100 мл, этиловый спирт - 174 мл, H2O - 726 мл) 20 мл и буфер STE - 20 мл. Фильтраты переносили в центрифужные пробирки и добавляли 30 мл этилового спирта, центрифугировали 30 мин при 8000 об / мин, сливали надосад и подсушивали на фильтровальной бумаге при температуре +18-20 º С 2 ч, добавляли 200 мкл 10X РНК-буфера (0,35% (w / v) Orange G, 30% (w / v) Ficoll 400, 1 mM EDTA). В полученный раствор вводили 1 мкл ДНКазы в присутствии 1 мкл MgCl2 и 1 мкл S1 нуклеазы и переносили в термостат на 1 час по температуре +37 º С.Электрофоретическое разделение нуклеиновых кислот длРНК осуществляли в 1%-ном агарозном геле в течение 30 мин при напряжении 5-15 В/см2 (рис. 3). Остальные образцов хранили при температуре - 20 º С.Выделение суммарной РНК проводили с помощью коммерческого набора "рыбой-золь-А", реакцию обратной транскрипции "Реверта-L-100", согласно рекомендациям производителей.Полимеразной цепной реакции (ПЦР) осуществляли в амплификатора "GeneAmp 2400" (Applied Biosystems). Стандартная реакционная смесь для ПЦР, объемом реакции 50 мкл содержала: воду mQ, (33 мкл), 10xПЛР-буфер (5 мкл),75 мм MgCl2 (1,5 мкл), 20 мм dNTP (1 мкл), 20 п / моль каждого из праймеров, 2,5 единиц Taq ДНК-полимеразы и 5 мкл кДНК. Условия реакции амплификации: 2 мин при температуре +96 ° C (1 цикл), 30 с при температуре +94 ° С, 30 с при температуре +55 ° С, 3 мин при температуре 72 ° С (30 циклов), 10 мин при температуре 72 ° C (1 цикл). После проведения ПЦР продукты реакции разделяли электрофорезом в 1%-ном агарозном геле, окрашивали 1%-м раствором бромового этидия, визуализировали с помощью UV лайтбокса.Нуклеотидную последовательность ПЦР-фрагментов определяли на генетическом анализаторе ABИ PRИSM 3130 (Applиed Bиosystems, США) с использованием набора BиgDye ® termиnator, v.3, 1, согласно инструкции производителя. Результат считался достоверным, если в условиях сопоставления ДНК-последовательностей, полученных из правого и левого праймера, не было обнаружено различий хотя бы в один нуклеотид.Для оптимизации получения безвирусного маточного материала (мицелия) шампиньоны двоспоровои нами использованы питательные среды на основе модификаций базовых сред КГА (картофельно-глюкозный агар).Синтез олигонуклеотидов проводили автоматизировано на 3400 ДНК синтезаторе фирмы Applied Biosystems. Cинтезовани олигонуклетотиды очищали методом электрофореза в агарозном геле. Статистическая обработка полученных результатов осуществляли по методу (Б.А. Доспеховим, 1985).Результаты исследований. С помощью электронной микроскопии в образцах шампиньоны мы обнаружили X-вирус шампиньоны. Наблюдали тела палочковидные формы размерами ~ 70 нм. В некоторых образцах шампиньонов MVX не зафиксировано, несмотря на то, что методом хроматографии длРНК-анализа он был идентифицирован.Геномы MVX шампиньоны двоспоровои представлены двухцепной РНК [Grogan, 2002; Gaze, 2003; Maffettone, 2007]. Поэтому геномной РНК выделяли вместе с РНК вирусов грибов шампиньоны двухспорового.Таким образом, длРНК-анализ подтвердил наличие вируса в плодовых телах, однако электронная микроскопия не показала положительного эффекта. Поэтому, дальнейшие наши исследования были направлены на оптимизацию выделения, очистки и диагностику двухцепной РНК-вирусов из микроскопических и съедобных грибов, также создание собственных диагностических тест-систем на выявление MVX в шампиньоны двоспоровои методом мультиплексного ПЦР.Метод выделения, очистки и идентификации вирусных двухцепной РНК из культуры грибов (А. bisporus).В результате анализа длРНК, выделенных из плодовых тел шампиньона путем применения электронной микроскопии, установлено наличие вирусной инфекции.Присутствие фрагментов длРНК вирусного происхождения совпадает с литературными данными [Grogan, 2002; Adie, Gaze, 2003; Maffettone, Mills, 2007] о возможности поражения грибов специфическими миковирусамы. Можно утверждать эффективность предложенной нами методики идентификации длРНК, выделенных из плодовых тел шампиньона двоспоровои. После проведенной нами серии экспериментов рекомендуется использовать навеску исходного материала 10 г, объем STE буфера для первичной отмывки 30 мл, добавление 50% от объема фенола, 17 мл хлороформа и 2 мл изоамилового спирта. Время получена возможность качественно проводить диагностику и идентификацию РНК-содержащих вирусов микроскопических и съедобных грибов [Иванова, Мельничук, Антипов, Оверченко, Клюваденко, Бойко, 2012]. Путем электрофоретического разделения мы идентифицировали длРНК-фрагмент размером около 6 тыс. пар нуклеотидных остатков (ПНЗ).Методика выделения и электрофорез длРНК дали возможность утверждать о детекцию существующими методами Х-вируса шампиньоны, принадлежащей группе Еndornavirus [Adie et al., 2004]. Геном представлен двухцепочечной линейной РНК размером 6,435 kb. На стадии воспроизводства в клетках этот патоген образует несколько фрагментов специфических длРНК, согласно нашим [Иванова, Мельничук, Антипов, Оверченко, Клюваденко, Бойко, 2012] и зарубежными [Grogan, 2002; Adie, Gaze, 2003; Maffettone, Mills, 2007] исследователями.Разработка диагностических тест-систем на выявление MVX на шампиньоны двоспоровий методом ПЦР.Для создания дизайна праймеров специфичных к нуклеотидных последовательностей MVX на шампиньоны двоспоровий нами проведено биоинформативний анализ, первым этапом которого был скрининг консервативных последовательностей генов, кодирующих белок оболочки соответствующего вируса с помощью генетического банка данных (GenBank). На основании обобщенных данных относительно известных нуклеотидных последовательностей вирусных геномов обнаружено строго специфичны консервативные нуклеотидные последовательности, которые могут быть использованы в качестве матрицы для олигонуклеотидных затравок в процессе синтеза вирусоспецифические фрагментов нуклеиновых кислот. Анализ проводили путем программного обеспечения «MultAline» (Multiple sequence alignment). Нуклеотидные последовательности из генетического банка выбрано случайно, но так, чтобы охватить как можно больше ареал распространения вирусов шампиньоны в каждом конкретном случае. Дизайн праймеров разработан таким образом, что температура отжига всех олигонуклеотидов находилась в пределах +52-55 º С. В дальнейшем с суммарной РНК было получено комплементарную РНК цепи ДНК (кДНК) с помощью реакции обратной транскрипции. К реакции добавляли 1 мкг суммарной РНК каждого образца. ПЦР проводили в режиме с температурой отжига праймеров + 52 ° С. В протестированных образцах плодовых тел шампиньонов обнаружено MVX.Данные разработанных собственных тест-систем подтверждено результатами выделения, очистки и диагностики двухцепной РНК из шампиньонов. Одновременно на электрофореграмме также обнаружены неспецифические продукты амплификации, размер которых не соответствует размеру ожидаемых продуктов. Неспецифические продукты могли появиться в результате примененных мягких условиях температурного режима отжига праймеров при температуре +49 0С. По жестких условий неспецифических фрагментов не выявлено. Оптимальная температура отжига праймеров установлена экспериментальным путем и составила +520 С. В этих условиях появления неспецифических продуктов ПЦР не наблюдалось, а количество ампликона была достаточной для четкой визуализации в агарозном геле.
ЛИТЕРАТУРА

1. Grogan, H.M. The effects of Virus X on cropping (DEFRA funded research) / H.M Grogan // HDC News. – 2004.– №101.– Р. 29–30.

2.MVX disease and double–stranded RNA elements in Agaricus bisporus / [H.M. Grogan, S. Holcroft, B. Adie еt al.] // Mushroom Science.– 2004.– №16.– P. 411–420.

3. Іванова Т.В. Виявлення вірусних хвороб у плодових тілах печериці двоспорової (Agaricus bisporus (J.Lge) lmbach) [Електронний ресурс] / Т.В. Іванова // Наукові доповіді НУБіП України – 2011. – № 1(23). – 12 с. Режим доступу http://www.nbuv.gov.ua/e-ournals/Nd/2011_7/11tvib sm.pdf

4. Патент на корисну модель. № 68995 Україна. МПК (2012) С12Q 1/68. Спосіб діагностики MVX методом мультиплексної полімеразної ланцюгової реакції / Іванова Т.В., Антіпов І.О., Мельничук М.Д. Заявник та власник патенту НУБіП України.- № 68995. Заявл. 01.06.2011. Опубл. 24.04.2012, Бюл. № 8.

5. Патент на корисну модель. № 68996 Україна. МПК (2012) С12Q 1/68. Спосіб діагностики та ідентифікації РНК-вмісних вірусів мікроскопічних та їстівних грибів / Іванова Т.В., Антіпов І.О., Бойко О.А., Мельничук М.Д., Клюваденко А.А., Оверченко В.В. Заявник та власник патенту НУБіП України. – № 68996. Заявл. 01.06.2011. Опубл. 24.04.2012, Бюл. № 8.

УДК 581.14.03/07:633.16
ВЛИЯНИЕ САЛИЦИЛОВОЙ КИСЛОТЫ НА УСТОЙЧИВОСТЬ ЯРОВОГО ЯЧМЕНЯ К ТЕМНО-БУРОЙ ПЯТНИСТОСТИ
Л.В. КАПЫЛОВА, аспирант, Л.М. АБРАМЧИК, к.б.н., ст.н.с.,

Л.Ф. КАБАШНИКОВА, д.б.н., доцент, зав.лаб.

ГНУ «Институт биофизики и клеточной инженерии НАН Беларуси,

Минск, Республика Беларусь


В полевых условиях растения часто подвергаются действию разнообразных стрессовых факторов окружающей среды. Среди них важное место занимают многочисленные инфекционные болезни, которые поражают растения на всех этапах онтогенеза.

Темно-бурая пятнистость вызывается грибом Bipolaris sorokiniana и при наличии благоприятных условий снижает урожай ярового ячменя на 20-40%. Признаки заболевания выявляются на протяжении всей вегетации – от прорастания семян до полной зрелости [1,2].

Растительные организмы обладают способностью противостоять различным стрессовым факторам посредством развития комплекса физиолого-биохимических реакций [3,4]: изменения внутриклеточных ионных потоков, накопления активных форм кислорода (АФК), активации процессов перекисного окисления липидов, ферментов, образования стрессовых белков и т.д.

Согласно современным представлениям, одним из индукторов устойчивости растений к биотическим и абиотическим стрессовым факторам считается салициловая кислота (СК)– эндогенный регулятор роста и важный компонент сигнальных систем [5]. Её концентрация многократно повышается в тканях растений при инфицировании [6]. Возможный эффект СК при заражении обусловлен ее модулирующим влиянием на активность про- и антиоксидантных ферментов, регулирующих содержание АФК [6]. Таким образом, экзогенная СК может выступать в качестве стимулятора фитоиммунных реакций. Препараты, созданные на основе СК, позволят реализовать генетический потенциал устойчивости, в результате чего растения смогут противостоять инфекции с помощью собственных метаболитов. Благодаря индукции системной устойчивости растений на весь период вегетации кратность обработок сокращается до 1-2 раз в сезон. Биологически активные препараты не токсичны, не оказывают губительного влияния на экологическую систему и безопасны для человека.

Целью нашей работы являлось исследование влияния экзогенной салициловой кислоты на рост и развитие растений ярового ячменя и их устойчивость к действию патогенной инфекции Вipolaris sorokinianа, вызывающего темно-бурую пятнистость листьев.

Исследования проводились в условиях вегетационного опыта. Семена ячменя высаживали в почву в вегетационные сосуды. В 16-дневном возрасте проростки опрыскивали раствором СК (10-4М). Инфицирование растений в 20-дневном возрасте проводили путем нанесения на поверхность листьев суспензии вирулентных спор Bipolaris Sorokiniana на стадии появления двух листьев. Генерацию Н2О2 оценивали по реакции со скополетином [7]. Функциональную активность пероксидазы измеряли, используя бензидин и перекись водорода [8]. Содержание фотосинтетических пигментов определяли спектрофотометрическим методом по Шлыку А.А. [9]. Флуоресцентные параметры ФС2 измеряли на флуориметре Teaching-PAM (Walz, Германия) [10].

Анализ физиологического состояния растений ячменя, проведенный через 17 дней после инфицирования грибом Bipolaris Sorokiniana, показал, что инокуляция спорами патогена приводит к ингибированию ростовых процессов, выражающемуся в снижении сырой массы (на 38%) и высоты растений (на 8%) по сравнению с контролем. Влияние фитопатогена усиливалось в процессе онтогенетического развития растений, в результате чего на 56-й день развития отставание инфицированных растений от контрольных по накоплению сырой массы и высоте составило 53% и 24%, соответственно.

Измерение содержания пероксида водорода на 17 сутки после заражения в 3-м листе с видимыми признаками инфицирования показало увеличение данной АФК на 45% к контролю, что может свидетельствовать о развитии окислительного стресса в растении. В условиях поражения растений ячменя патогеном выявлено повышение активности антиоксидантного фермента пероксидазы в 1,8-2,7 раза по сравнению с контролем на протяжении всего периода вегетации.

Известно, что устойчивость фотосинтетического аппарата (ФСА) играет важнейшую роль в защите растений от действия стрессоров. В ходе эксперимента установлено, что обработка растений ячменя спорами гриба Bipolaris sorokinianа вызывала ингибирование функциональной активности ФС 2, о чем свидетельствует снижение максимальной флуоресценции хлорофилла а на всех исследованных этапах роста растений.

Защитный эффект СК наблюдался уже на ранних стадиях развития инфицированных растений и заключался в снижении ингибирующего действия патогена на ростовые показатели. Так, масса 1 растения после обработки СК была лишь на 20% ниже, чем в контроле, тогда как у зараженных растений без обработки этот показатель снизился на 38%. В ходе дальнейшего развития растений СК способствовала увеличению ростовых показателей инфицированных растений до контрольных значений. При этом потенциальный квантовый выход фотохимичеcких реакций ФС 2, нарушенный патогеном, возвращался к исходному уровню на фоне увеличения содержания в листовых тканях каротиноидов на 7-27% и хлорофилла на 8-25% в зависимости от стадии развития растений ячменя. На 17-сутки после заражения СК вызывала снижение активности процессов перекисного окисления липидов до 40% по отношению к контролю и, возможно, таким образом повышала нарушенную Bipolaris sorokinianа устойчивость клеточных мембран. В зараженных растениях CК вызывала снижение активности пероксидазы, которое коррелирует со степенью поражения растения фитопатогеном, и может свидетельствовать о подавлении инфекционного процесса в растениях ячменя после обработки СК. Действие СК на самых поздних этапах онтогенеза проявилось в повышении до контрольного значения массы колоса, сниженной на 20% в результате поражения фитопатогеном.

Таким образом, можно предположить, что защитный механизм СК, как природного индуктора устойчивости растений, заключается в стабилизации работы фотосинтетического аппарата, повышении устойчивости мембранных липидов, а также в развитии других адаптационных процессов, приводящих к увеличению ростовых показателей и продуктивности зараженных растений.
ЛИТЕРАТУРА
1. Пересыпкин, В.Ф. Сельскохозяйственная фитопатология / В.Ф. Пересыпкин. М.: Агропромиздат, 1989. – 480 с.

2. Jagdish, K. Bipolaris sorokiniana, a cereal pathogen of global concern: cytological and molecular approaches towards better control / K. Jagdish [et al] // Molecular plant pathology. – 2002. – V. 3(4). – P. 185–195.

3. Шакирова, Ф.М. Неспецифическая устойчивость растений к стрессовым факторам и ее регуляция / Ф.М. Шакирова. Уфа: Гилем, 2001. – 160 с.

4. Яруллина, Л.Г. Клеточные механизмы формирования устойчивости растений к грибным патогенам / Л.Г. Яруллина, Р.И. Ибрагимов. – Уфа: Гилем, 2006. – 232с.

5. Alvarez, M.A. Salicylic acid in machinery of hypersensitive cell death and disease resistance / М.А. Alvarez // Plant Mol. Biol. - 2000. - V. 44. - P. 429-442.

6. Васюкова, Н.И. Индуцированная устойчивость растений и салициловая кислота (обзор) / Н.И. Васюкова, О.Л. Озерецковская // Прикладная биохимия и микробиология. - 2007. - Т. 43. - №4. С. 405-411.

7. Mohanty, J.G. A highly sensitive fluorescent micro-assay of H2O2 release from activated human leukocytes using a dihydroxyphenoxazine derivative / J.G. Mohanty [et al.] // J. Immunol.Methods. – 1997. – Vol. 96, №2. – Р. 133-141.

8. Гавриленко, В.Ф. Большой практикум по физиологии растений / В.Ф. Гавриленко, М.Е. Ладыгина, Л.М. Хандобина. М.: Высшая школа, 1975. – 392 с.

9. Шлык, А.А. Определение хлорофилла и каротиноидов в экстрактах зеленых листьев // Биохимические методы в физиологии растений/А.А. Шлык.М.:Наука, 1971. – С. 154-170.

10. Krause G.H., Weis E. Chlorophyll fluorescence and photosynthesis: The basics // Annu. Rev. Plant. Physiol. Mol. Biol. – 1991. – Vol. 42. – P. 313-349.


УДК 632.7: 633.11 (477.72)
МЕРЫ РЕГУЛИРОВАНИЯ ВРЕДИТЕЛЕЙ В ПОСЕВАХ

КУКУРУЗЫ НА ЮГЕ УКРАИНЫ
С.В. Коковихин, доктор с.- х. наук, профессор

А.В. Колченко, младший научный сотрудник,

Институт орошаемого земледелия,

г. Херсон, Украина
В связи с расширением посевных площадей кукурузы, Украина стала одним из важных экспортеров зерна этой культуры, спрос на которое постоянно растет. В связи с этим требуются усовершенствованные технологи выращивания кукурузы, при этом возрастает роль применения современных приемов защиты растений от вредителей, количество которых возрастает, поэтому проблемы защиты посевов будут заостряться, что требует проведения научных исследований по данному направлению.

Одним из главных элементов интегрированной защиты растений при выращивании кукурузы является получение, анализ и систематизация данных о видовом и количественных состояние вредителей с целью принятия решений по профилактическим и корректирующим мероприятиям, а также оценке эффективности их применения (экономические показатели, экологическая безопасность, прогнозирование и тому подобное.

Наибольшую опасность для посевов кукурузы имеет комплекс почвенных вредителей, численность которых в последнее время значительно увеличилась и почти повсеместно в два-три раза превышает порог вредоносности. Такая ситуация обусловлена как потеплением климата, так и упрощением систем земледелия, в том числе, основной обработки почвы, нарушение севооборотов, минимизация химической защиты растений и т.д.

Обязательным приемом для борьбы с вредными организмами является протравливание семян. Для этой цели рекомендуется использовать, как правило, комбинированные протравители, содержащие в своем составе не только фунгицид, но и инсектицид, защищающий высеянные семена, а затем и проростки от почвообитающих вредителей. К таким препаратам относят: Гаучо 70WS,с.п., Круизер 350FS,т.к.с., Сидоприд 600,т.к.с.,Форс Зеа 280FS,т.к.с.

Фитосанитарное состояние кукурузных полей и появление на территории Украины опасного специализированного вредителя – западного кукурузного жука (диабротики) обуславливает необходимость контроля видового и количественного состава вредных организмов и поддержания четких зональных интегрированных систем защиты культуры.

Для предотвращения распространения западного кукурузного жука запрещается завозить на территорию Украины зерно, кочаны и части растений кукурузы из стран с распространением жтого карантинного объекта в период с конца апреля до ноября. На территорию, где выявлен вредитель, налагают карантин. Из агротехнических мероприятий эффективным приемом является соблюдение севооборота, который включает, кроме кукурузы, другие зерновые, зернобобовые, многолетние травы и другие культуры.

Ранние посевы кукурузы повреждаются диабротиком значительно меньше, чем поздние. Засушливые условия в период появления личинок западного кукурузного жука приводят к уменьшению численности вредителя. И, напротив, интенсивное орошение посевов кукурузы в период окукливания личинок (вторая половина июня – начало июля) существенно уменьшают запас вредителя в почве.

Уменьшению численности западного кукурузного жука способствуют энтомофаги. Хорошо себя зарекомендовал энтомопатогенный гриб Beaveria bassiana, который развивается на жуках.

Из химических средств защиты против западного кукурузного жука в странах Западной Европы эффективные обработки семян Круизером и Гаучо, а также опрыскивания инсектицидами – Талстар, Диазинон, Метилпаратион, Дурсбан и другие.

Попытки методом генной инженерии получить стойкие к западному кукурузному жуку трансгенные линии кукурузы, в которых в хлоропластах продуцируется токсин Cry 3 Bt (бактерий Bacillus thuringiensis), пока не дали ожидаемых результатов. Причина этого в том, что токсины производятся в хлоропластах, а личинки питаются корнями, где хлоропласты практически отсутствуют, в результате значительное количество личинок выживает, а имаго этих личинок ничем не отличаются от тех, которые развивались на обычной кукурузе.

Кроме того, важным для всех природно-климатических зон страны при выращивании кукурузы является своевременное и качественное выполнение организационно-хозяйственных и агротехнических приемов на всех полях севооборота, что дает возможность значительно улучить ситуацию на сельскохозяйственных угодьях, уменьшить в 2-3 раза численность вредителей и потребность в использовании инсектицидов.

В период от появления всходов до удлинения стебля важен систематический мониторинг динамики численности на посевах культуры таких вредителей: чернышей, южного серого и серого долгоносика, блошек, шведской мухи, лугового мотылька, листоядных и подгрызающих совок, саранчовых и др. При появлении отдельных видов или групп фитофагов в численности, которые превышают экономических порог вредоносности (ЭПВ), необходимо установить локальное размещение вредителей на отдельных полях и применять инсектициды, такие как Абакус, м.к.э. 1,5 л/га, Карате 050 ЕС,к.э., Карате Зеон 050 SС, м.к.с.0,3 л/га, Децис, 2,5% к.э. 0,5-0,7 л/га и др.

По прогнозам на 2013 год, ожидается всплеск массового размножения лугового мотылька. В условиях Южной Степи Украины за вегетационный период размножается в 2-4 поколениях.

Характерной особенностью данного вида является периодичность массовых размножений. В годы депрессивного состояния на полях встречаются, одиноки особи, а во время всплеска – численность гусениц очагами может превышать 500-1000 экз./м², что мы могли наблюдать осенью 2012 года. Кроме этого, бабочки способны мигрировать на значительные расстояния.

Учитывая повышенную угрозу от вредителей необходимо подбирать толерантные гибриды кукурузы для конкретной почвенно-климатической зоны, а так же придерживаться научно обоснованной системы защиты растений от вредных организмов и других составляющих элементов агротехнологий.
ЛИТЕРАТУРА
1. Трибель С.О., Стригун О.О., Бахмут О.О., Бойко М.Г. Вредители кукурузы. / Колобиг. Киев, 2009. – 50с.

2. Бублик Л.И., Васечко Г.И. Справочник по защите растений./ Урожай. Киев,

1999. – 743с.

3. Перелік пестицидів і агрохімікатів, дозволених до використання в Україні. - Київ, Юнівест Медіа, 2012. – С. 285,182,173,179.


УДК 502:628.543
Микроводоросль Chlorella vulgaris

Каталог: jspui -> bitstream -> 123456789
123456789 -> Учебное пособие для студентов высших учебных заведений, 4-5 курсов факультетов «Бизнес-управление»
123456789 -> Учебно-методическое пособие по дисциплине «корпоративное управление» Рассмотрено на заседании кафедры
123456789 -> Методические рекомендации для слушателей, обучающихся по специальности
123456789 -> Практикум по переводу с немецкого языка аспект «общественно-политический перевод»
123456789 -> Практикум по переводу с немецкого языка аспект «общественно-политический перевод»
123456789 -> Введение в глобалистику
123456789 -> Методические рекомендации для студентов заочной формы обучения, обучающихся по направлению подготовки
1   ...   13   14   15   16   17   18   19   20   ...   35

  • ВЛИЯНИЕ САЛИЦИЛОВОЙ КИСЛОТЫ НА УСТОЙЧИВОСТЬ ЯРОВОГО ЯЧМЕНЯ К ТЕМНО-БУРОЙ ПЯТНИСТОСТИ
  • МЕРЫ РЕГУЛИРОВАНИЯ ВРЕДИТЕЛЕЙ В ПОСЕВАХ КУКУРУЗЫ НА ЮГЕ УКРАИНЫ
  • Микроводоросль